Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

     

Sắc ký lỏng HPLC là một trong những kỹ thuật để bóc hỗn hợp những chất thành những thành phần đơn nhất dựa trên sự can dự giữa hóa học phân tích cùng với pha rượu cồn (thường là hóa học lỏng) với pha tĩnh (thông hay là các chất rắn). Trộn động có theo hóa học phân so với di chuyển hẳn sang pha tĩnh đứng yên.Các thành phía bên trong mẫu thúc đẩy mạnh với pha tĩnh sẽ dịch rời chậm hơn so với những thành phần có liên quan yếu hơn.

Bạn đang xem: Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

*

Sơ đồ nguyên tắc cơ bạn dạng hệ thống sắc ký kết lỏng hiệu năng cao HPLC

Sắc ký lỏng hiệu năng caoSắc cam kết lỏng tính năng cao (HPLC) là một trong dạng sắc ký lỏng cột được cải tiến, thay vị dung môi chảy bên dưới áp suất của trọng lực, dung môi rã với áp suất cao lên tới 400 atm, làm tăng tốc độ chảy của dung môi trộn động.HPLC chuyển động với chính sách cơ bản: bóc tách một mẫu tất cả hỗn vừa lòng thành phần thành các bộ phận cấu thành của nó dựa trên sự khác biệt về ái lực giữa những phân tử không giống nhau với pha động và pha tĩnh được sử dụng trong quy trình tách.Phân loạiTrong sắc cam kết HPLC phân loại dựa trên cơ chế bóc của pha tĩnh có các loại sau:1. HPLC thuận (NP-HPLC)Sắc ký pha thuận áp dụng pha tĩnh phân cực và pha hễ không phân cực. Pha tĩnh hay là silica, pha động điển hình nổi bật là hexane, methylene clorua, chloroform, dietyl ete với hỗn hợp các chất này.Các chất phân cực được bảo quản trên bề mặt cực của cột pha thuận lâu hơn, những chất ko phân cực thoát khỏi cột trước .2. HPLC pha hòn đảo (RP-HPLC)Pha tĩnh không phân rất (kỵ nước), trong khi pha động là hóa học lỏng phân cực, ví dụ tất cả hổn hợp nước và metanol hoặc acetonitril.Ngược lại với trộn thuận, những chất ko phân rất được duy trì trên cột trộn đảo lâu bền hơn nên ra thoát khỏi cột sau.Các hóa học phân cực đi ra cột trước.3. HPLC rây phân tửCột được nhồi bằng những vật liệu có kích cỡ lỗ rỗng chọn lọc đúng chuẩn và các hạt được phân bóc theo size phân tử của nó. Những phân tử lớn hơn nhanh chóng được rửa qua cột; các phân tử bé dại đi qua các lỗ rỗng của hạt bắt buộc đường đi lâu bền hơn và rời khỏi cột lâu hơn4. HPLC hội đàm ionBề phương diện pha tĩnh được tủ bởi các điện tích ion tích điện trái vệt với các ion mẫu. Kỹ thuật này được sử dụng gần như độc quyền với những mẫu ion hoặc ion hóa.Điện tích trên chủng loại càng mạnh bạo thì sẽ bị hút to gan lớn mật hơn vào mặt phẳng ion và bởi đó, nó sẽ tiến hành lưu giữ lại với thời gian hơn nhằm rửa giải. Pha rượu cồn là các dung dịch đệm, được kiểm soát và điều hành cả pH cùng cường độ ion.

*

Cấu tạo ra của hệ thống HPLC1. Bình dung môiPha động trong HPLC thường xuyên là láo hợp những thành phần chất lỏng phân rất và ko phân cực có nồng độ tương ứng biến hóa tùy nằm trong vào yếu tắc của mẫu.2. Bơm - phần tử phân phối dung môiBơm pittong hút pha động từ bình dung môi đẩy vào hệ thống qua các bộ phận tiêm mẫu, cột với đầu dò tiếp đến qua bình đựng dung môi thải. Tuỳ thuộc vào các thông số kỹ thuật hệ thống (ví dụ kích thước cột, form size hạt của trộn tĩnh, vận tốc chảy và thành phần của pha động) áp suất quản lý và vận hành ở 6000psi (413 bar) hoàn toàn có thể lên cho tới 18 000 psi (1240 bar).

Xem thêm: Hướng Dẫn Đăng Ký 4G Cho Vinaphone Ưu Đãi Theo Ngày, Tháng, Năm 2022

3. Bộ tiêm mẫuBộ phận tiêm mẫu rất có thể là bộ phận tiêm mẫu tự động hóa hoặc tiêm mẫu bằng tay có thành phần kim phun. Kim phun mẫu cho hệ thống HPLC sẽ hỗ trợ việc tiêm mẫu chất lỏng trong phạm vi 0,1-100 mL thể tích với độ tái lập cao và dưới áp suất cao (lên cho 18 000 psi).4. Cộtm.mCột so sánh thường được làm bằng thép ko gỉ, nhiều năm từ 50 - 300 mm với có 2 lần bán kính trong từ bỏ 2 - 5 mm. Thông thường, Cột được nhồi bằng các hạt silica / silica lai có kích cỡ từ 2,5 – 10Trong quá trình hoạt động, ánh nắng mặt trời của pha cồn và cột nên được giữ bất biến trong quá trình phân tích. Vì vậy trong thực tế, các hệ thống có thêm phòng điều nhiệt độ cột.5. Đầu dò - DetectorDetector nằm tại vị trí cuối cột có trách nhiệm phát hiện các chất phân tích khi chúng được cọ giải từ cột sắc ký. Những đầu dò thường được áp dụng là đồ vật UV-VIS, huỳnh quang, khối phổ, tán xạ cất cánh hơi…6. Thiết bị thu thập dữ liệuTín hiệu từ trên đầu dò có thể được thu thập trên vật dụng ghi biểu đồ vật hoặc bộ tích hợp năng lượng điện tử khác biệt với các ứng dụng lưu trữ, phân tích và xử lý tài liệu sắc ký.Các ứng dụng của HPLCThông tin tích lũy được qua khối hệ thống HPLC bao hàm độ phân giải, định lượng phù hợp chất. HPLC cũng cung cấp trong việc bóc tách hóa chất và tinh chế.Ngoài ra, thực hiện HPLC trong số ứng dụng bao gồm:Ứng dụng dược phẩm1. Để kiểm soát sự bất biến của thuốc.2. Nghiên cứu và phân tích dược hễ học của những dạng chế biến dược phẩm.3. Kiểm soát unique dược phẩm.Ứng dụng môi trường1. Phân phát hiện các hợp chất phenolic trong nước uống.2. Theo dõi sinh học các chất ô nhiễm.Ứng dụng trong Pháp y1. Định lượng thuốc trong mẫu sinh học.2. Xác định steroid trong máu, nước tiểu, …3. đối chiếu về dung dịch nhuộm ngành dệt .4. Khẳng định cocaine và những loại thuốc không giống trong máu, nước tiểu…..Ứng dụng trong Thực phẩm1. Định lượng quality nước giải khát cùng nước.2. Phân tích đường trong nước ép trái cây3. Phân tích các hợp chất đa vòng4. Phân tích hóa học bảo quảnỨng dụng vào xét nghiệm lâm sàng1. Phân tích nước tiểu, phân tích phòng sinh vào máu.2. So sánh bilirubin, biliverdin trong xôn xao gan.3. Phát hiện tại Neuropeptide nội sinh vào dịch nước ngoài bào của não...